Die passende Antwort auf häufig gestellte Fragen

Finden Sie erklärende Informationen zu unseren Produkten und Dienstleistungen, indem Sie auf die folgenden Links klicken.

Products & Services

Alle im Voraus bezahlten Barcode-Etiketten, Kits und Coupon-Codes sind drei Jahre ab dem Bestelldatum gültig und verfallen nach Ablauf dieser Frist.

Sie können wählen, eine E-Mail-Benachrichtigung zu erhalten, bevor eines Ihrer im Voraus bezahlten Sanger-Produkte abläuft, indem Sie dies in Ihren persönlichen Einstellungen festlegen.

Tube Labels sind Barcode-Etiketten die eine saubere und eindeutige Beschriftung Ihrer Proben, die Sie uns zur Sequenzierung einsenden, gewährleisten.
Sie werden primär für die Identifizierung Ihrer Auftrags- und Kundendaten benötigt, erlauben uns aber zusätzlich eine schnellere und fehlerfreie Bearbeitung Ihrer Proben.

Eine Übersicht welche Labels wann und von wem verwendet wurden erhalten Sie unter "Meine Sanger Kits & Labels".

Unsere Tube Labels können kostenlos Online bestellt werden.

Falls Sie Ihre eigenen Primer zur Sequenzierung mitsenden, verwenden Sie die gelben Primer-Barcodes um diese zu Kennzeichnen. 

Eine Übersicht welche Labels wann und von wem verwendet wurden erhalten Sie unter "Meine Sanger Kits & Labels".

Primer Barcodes können kostenlos Online bestellt werden.

Ihre Sequenzierergebnisse werden nach Fertigstellung 6 Monate in Ihrem persönlichem Account gespeichert. Während diesem Zeitraum können Sie Ihre Daten herunterladen und abspeichern.

Bei allen Services werden DNA Proben für 4 Wochen aufbewahrt.

Synthetisierte Primer werden für 4 Wochen kostenlos gelagert
Aufbewahrung von synthetisierten Primern für ein Jahr ist gegen Aufpreis möglich

Mitgesendete Primer werden für 10 Tage kostenlos gelagert
Aufbewahrung von mitgesendeten Primern für 6 Monate ist gegen Aufpreis möglich

In diesem Zeitraum haben Sie die Möglichkeit weitere Sequenzierreaktionen nachzubestellen.

Premixed Proben (DNA mit Primer vorgemischt) und Proben für den Ready2Load Service werden nach Abschluß des Auftrags verworfen.

Ja, wir akzeptieren DNA-Proben mit schwierigeren Sequenzen. 

 

Bitte kontaktieren Sie unseren Customer Support für eine detaillierte Beratung.

Übersicht der Lieferzeiten für die meisten unserer Sanger-Services:

 

NightXpress Services Datenlieferung am nächsten Werktag bis Regulärer Nicht-NightXpress
Service
Datenlieferung am nächsten Werktag bis
Mix2Seq NXP 12:00 Uhr Mix2Seq 18:00 Uhr
LightRun NXP 13:00 Uhr LightRun Tube 18:00 Uhr
PlateSeq Mix NXP 13:00 Uhr PlateSeq Mix 18:00 Uhr
    LightRun 96 18:00 Uhr
    TubeSeq Supreme 18:00 Uhr
       
    PlateSeq DNA 18:00 Uhr
    PlateSeq PCR 18:00 Uhr


Wichtige Information:


Die angegebenen Lieferzeiten hängen hauptsächlich von der Ankunftszeit der Proben im Labor ab.


Für viele europäische Städte bieten wir koordinierte Abhol- und Transportdienste mit Eurofins DropBoxen an, um eine pünktliche Lieferung im Labor zu gewährleisten.


Diese Logistikdienstleistungen können jedoch auch höherer Gewalt oder unvorhersehbaren Änderungen unterliegen, wie z.B. Streiks, Unfälle, Stürme, Überschwemmungen. In solchen Fällen kann Eurofins Genomics die angegebene Datenlieferzeit nicht garantieren und ist nicht verantwortlich für Verzögerungen, die durch Logistikdienste verursacht werden.


Zusätzlich gelten unsere Allgemeinen Geschäftsbedingungen (AGB).

 

 

How to order

Wir empfehlen als einfachste und komfortabelste Möglichkeit über unseren Online Shop zu bestellen. Im Bestell-Menü finden Sie alle Links zu den entsprechenden Bestellseiten.

Informationen zur Probenvorbereitung und Probenhandhabung für die einzelnen Services finden Sie auf der jeweiligen Produktseite unter „Probenvorbereitung”.

Eurofins Genomics haben zur kostenlosen Abholung Ihrer Proben bereits hunderte von DropBoxen installiert. Den Standort Ihrer nächstgelgenen DropBox mit entsprechender Abholzeit können Sie in Ihrem Account einsehen, sofern Sie eingeloggt sind. 

Falls sich keine Dropbox in Ihrer Nähe befinden sollte, können Sie uns Ihre Proben natürlich auch per Post oder über andere Lieferunternehmen zukommen lassen. Die entsprechende Adresse wird Ihnen während des Bestellvorgangs angezeigt.

 

Ja, unabhängig von der Probenart, können Sie mehrere Reaktionen pro Template definieren. Folgen Sie einfach der Beschreibung auf der Bestellseite.

 

Sie können bis zu 15 Platten auf einmal hochladen bzw. einzeln eingeben und im Warenkorb speichern. Es gibt keine Maximalmenge pro Auftrag.

 

Neue Sequenzierreaktionen mit gelagerter DNA können innerhalb der Aufbewahrungszeit von 4 Wochen bestellt werden.

Wenn Sie Ihre Proben in Tubes gesendet hatten, verwenden Sie einfach die selbe Bestellseite und geben die Anfangsbuchstaben der entsprechenden DNA ein. Das System listet Ihnen alle gelagerten Proben, die mit diesen Anfangsbuchstaben beginnen auf.

Falls Sie neue Reaktionen für vereinzelte Proben aus einer Platte nachbestellen wollen, finden Sie die Option "Aus Platte nachbestellen" auf der selben Bestellseite sowie den Namen der gelagerten Platte. Selektieren Sie aus dieser Platte die entsprechenden Proben und spezifizieren Sie dafür die neuen Reaktionen.

Das Enddatum der Aufbewahrungszeit Ihrer DNA Proben finden Sie in Ihrem Account unter "Meine Proben & Primer".

 

Bei Prepaid Barcodes können Sie Zusatzleistungen, wie Primersynthese oder DNA-Minipräparation bestellen. Sie erhalten dann dafür eine separate Rechnung.

Sample Preparation

Sie finden alle Informationen bezüglich Probenaufbereitung, DNA- und Primerkonzentration sowie Transportempfehlungen auf den jeweiligen Produktseiten unter "Probenversand”.

Ermitteln Sie die optische Dichte (OD) mit einem Spektrophotometer bei 260nm und 280nm.

Um reproduzierbare und zuverlässige Ergebnisse zu erzielen, sollte der OD260-Wert zwischen 0,05 und 0,8 liegen. Das OD 260/280-Verhältnis sollte 1,8 sein. Werte unter 1,6 bzw. höher als 2,0 sind ein Hinweis auf Kontaminationen in der Probe, die die Konzentrationsbestimmung negativ beeinflussen und höchstwahrscheinlich zu schlechten Sequenzierergebnissen führen.

Wir empfehlen zusätzlich eine OD-Messung bei 230nm und 320nm. Ein hoher OD320-Wert deutet eine eventuelle Kontamination an. Der Wert sollte idealerweise bei 0,0 liegen. Das OD 230/260-Verhältnis sollte kleiner als 0,6 sein.

Um sich der Qualität Ihrer DNA ganz sicher zu sein, empfehlen wir eine zusätzliche Kontrolle mittels Agarosegel.

Für Plasmide empfehlen wir kommerziell erhältliche Mini Scale Präparations-Kits. Erfahrungsgemäß wird die DNA-Qualität und somit das Sequenzierergebnis verbessert, wenn der Waschschritt wiederholt wird.
Bitte senden Sie keine DNA, die mit Hilfe alkalischer Lyse oder Boiling-Methode nach Holmes und Quigley, 1981 ohne anschließende Säulchenreinigung isoliert wurde.

Für PCR-Produkte sollten kommerziell erhältliche PCR-Aufreinigung „Spin Column Kits“ verwendet werden.

Nein, bitte nicht.

EDTA bindet bivalente Kationen wie Magnesium (Mg++), die essentiell für die Taq-Polymerase sind. DNA ist über mehrere Tage in bi-destilliertem Wasser oder Tris-HCl bei Raumtemperatur stabil. In getrocknetem Zustand ist DNA sogar noch länger haltbar. Falls Sie Ihre DNA trotzdem in Tris-EDTA lagern möchten, entnehmen Sie vorab ein Aliquot des Eluats und senden dieses an unsere Sequenzierabteilung.

Das ist nicht notwendig; DNA ist über mehrere Tage in bi-destilliertem Wasser oder Tris-HCl bei Raumtemperatur stabil. Bitte lösen Sie Ihre DNA keinesfalls in Tris-EDTA, da dies negative Auswirkung auf die Taq-Polymerase hat.

Ja.

Wir bieten bei den meisten Sanger Sequenzier-Services DNA-Präparationen und PCR-Produktaufreinigungen als zusätzliche Dienstleistung an. 

Obwohl der verwendete Stamm signifikanten Einfluss auf die DNA-Qualität haben kann, sind die meisten E.coli Stämme zur DNA-Isolierung geeignet.

Bakterienstämme wie DH10b, DH5 alpha, XL10 Gold und TOP10 liefern in Kombination mit vielen der kommerziell erhältlichen DNA-Präparations-Kits in der Regel eine hohe DNA-Qualität und gelten daher für die Plasmid-Sequenzierung als sehr geeignet.

Eine schlechtere DNA-Qualität liefern Stämme, die hohe Mengen an Kohlehydraten produzieren, welche dann während der Lyse freigesetzt werden und Enzymaktivitäten blockieren. Beispiele sind HB101 und dessen Derivate wie beispielsweise TG1 und die JM100 Serie.
Auch Stämme mit mittleren oder hohen Endonukleaseaktivitäten wie beispielsweise der HB101, JM101 oder BL21 produzieren DNA mit geringerer Qualität. In diesem Fall sollte eine Proteinase-K-Behandlung in Betracht gezogen werden.

Das Produkt muss von Primer- und dNTP Rückständen befreit sein. Vorhandene Primerrückstände führen zu Mischsequenzen – bereits ein fünfprozentiger Anteil an Primer führt bereits zu unleserlichen Mischsequenzen. Die dNTPs würden die dNTP/ddNTP-Konzentration in der Sequenzierreaktion beeinflussen. Wir empfehlen daher die Aufreinigung mit kommerziell erhältlichen PCR-Aufreinigungs- „Spin Column“ Kits“.

Falls Sie Ihren PCR-Primer in der Sequenzierreaktion verwenden wollen, ist es notwendig Ihr PCR-Produkt über ein Agarose-Gel aufzureinigen. Andernfalls erhalten Sie eine Mischsequenz, da sich Ihr Primer höchstwahrscheinlich an beide Produkte, d.h. sowohl dem spezifischen als auch dem unspezifischen, binden wird.
Wenn Sie einen spezifischen Nested Primer für die Sequenzierung einsetzen wollen, könnte das auch ohne vorherige Aufreinigung funktionieren.
Die beste Garantie für ein gutes Sequenzierergebnis ist allerdings nach wie vor, dass sich nur ein Produkt in der PCR-Reaktion befindet. Um unspezifische PCR-Produkte zu vermeiden, hilft es bereits in den meisten Fällen die PCR-Konditionen anzupassen (z.B. Primer-Design, höhere Annealing-Temperatur und/oder geringere Primer Konzentration).

Primers & More

80 verschiedene Standard Primer stehen Ihnen jeweils für Ihre DNA Sequenzierungen zur Verfügung. Unter "Meine Proben & Primer" finden Sie die komplette Liste unserer Standard Primer, verwendbar für alle Services.

Ja. Geben Sie einfach den Namen und die Sequenz des Primers den Sie uns senden wollen auf der Bestellseite mit ein.

Bitte verwenden Sie unser Primer Barcodes um diese zu kennzeichnen! Die nötigen Volumen und Konzentrationsangaben finden Sie unter “Probenvorbereitung” auf unserer Website.

Ja. Geben Sie den Namen und die Sequenz des Primers, den Sie bei uns synthetisieren lassen wollen, unter "Order a Primer" bei Ihrer Sequenzierbestellung mit an.

Die entsprechenden Angaben zu Primer Konzentrationen und Lösungsvolumina finden Sie auf den jeweiligen Produktseiten unter "Probenvorbereitung".

Die Synthese eines Primers für Eurofins Services kann mittels Prepaid-Barcodes bezahlt werden. 

Technical Questions

Die DNA-Basenidentifikation beruht auf der Nomenklatur, die von der International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC) ausgegeben wurde. Bei nicht eindeutiger Basenidentifikation werden folgende IUPAC-Codes verwendet:

G/T = K C/T = Y A/C/G = V
A/G = R A/C = M C/T/G/ = B
G/C = S A/G/T = D A/C/G/T = N
A/T = W A/C/T = H

Eurofins Genomics verwendet ein Basecalling-Programm, dass jeden Peak jeder Base einzeln untersucht und anhand dessen an jede Base einen Qualitätswert (Q) vergibt. Qualitätswerte variieren im Bereich von 4 bis ca. 60, je höher der Wert, desto höher die Qualität.

Die Qualitätswerte haben einen logarithmischen Bezug zu Fehlerwahrscheinlichkeiten in der Sequenz. Eine Aufstellung sehen Sie in folgender Tabelle:

QualitätswertWahrscheinlichkeit einer falsch gelesenen BaseSequenzgenauigkeit
Q 10 1 in 10 90 %
Q 20 1 in 100 99 %
Q 30 1 in 1.000 99.9 %
Q 40 1 in 10.000 99.99 %
Q 50 1 in 100.000 99.999 %

Für alle Sanger Sequenzier-Services setzen wir die Cycle Sequencing Technologie (dideoxy chain termination / cycle sequencing) auf ABI 3730XL-Sequenzern ein.

Cycle-Sequencing, ist eine Modifikation der traditionellen Sanger-Sequenziermethode. Die Komponenten sind DNA, Primer, hitzebeständige DNA-Polymerase, 4 dNTP´s, 4 ddNTP´s (dideoxy terminator nucleotides) fluoreszenzmarkiert mit vier verschiedenen Farbstoffen sowie Puffer mit MG++ und K+-Ionen. Der einzelne Primer bindet an den komplementären DNA-Strang und wird in linearer Form verlängert. Diese Verlängerung wird so lange fortgeführt, bis zufälligerweise und abhängig von der komplementären Base ein bestimmtes ddNTP gekoppelt wird. Bedingt durch die Dideoxy-Beschaffenheit kann die Polymerase keine weitere Base mehr an diesem Fragment anfügen und die Verlängerung bricht ab.

Auf diese Weise erhält man am Ende einer definierten Anzahl an Zyklen eine Vielzahl an Fragmenten mit verschiedenen Längen und farbstoffmarkierten Enden.

Die stöchiometrische Beeinflussung der einzelnen Reaktionskomponenten stellt sicher, dass Fragmente jeder möglichen Länge generiert werden. Angenommen es werden 2.000 Basen generiert, dann erhalten wir alle Fragmente angefangen von n+1 bis 2.000, wenn n die Anzahl der Basen im Primer ist.

Der Hauptunterschied zwischen der traditionellen Sanger-Methode und der Cycle-Sequencing-Methode ist die Einführung der thermostabilen DNA-Polymerase. Der Vorteil dieser Polymerase ist, dass die Sequenzierreaktion immer wieder in demselben Tube wiederholt werden kann. Dabei wird das Reaktionsgemisch im Wechsel erhitzt und abgekühlt, einerseits um die DNA zu denaturieren und anderseits zum Annealen des Primers, um neue Sequenzketten zu bilden.

Aus diesem Grund wird weniger Template-DNA benötigt als bei konventionellen Sequenzierreaktionen.

Nach der Aufreinigung der Sequenzierreaktionen werden die Proben elektrokinetisch in die Kapillaren des 96-Kapillarsequenzierers injiziert.

Die negativ geladenen Fragmente wandern der Größe nach geordnet die Anode entlang, wobei die kleinsten Fragmente am schnellsten sind. Durch ihre angehängten ddNTP-Terminatoren kann die Basensequenz des Fragments gelesen werden.

Ein Laserstrahl regt in dem Moment, in dem die Fragmente das Detektionsfenster erreichen diese Farbstoffmoleküle an und produziert somit Fluoreszenzsignale. Diese Signale werden von allen 96 Kapillaren gleichzeitig gesammelt, spektral voneinander getrennt und auf eine CCD (charge-coupled device) Kamera fokussiert.

Äußerst hochentwickelte optische und elektronische Apparate produzieren ein farbiges Schema, das mit Hilfe einer Sequenzanalysesoftware in eine lesbare Sequenz übersetzt wird.

In dem Qualitätsreport (*.pdf Format) bestehend aus den ABI-Trace-Dateien werden die Qualitätswerte jeder einzelnen Base farbig unterhalb jedes Peaks dargestellt. Jede der vier verschiedenen Farben repräsentiert jeweils einen spezifizierten Qualitätsbereich.

Unter den unten aufgeführten Bedingungenkönnen auch nur verkürzte Prüfberichte erstellt werden.

Betrifft: Vereinfachte Prüfberichte nach DIN EN ISO 170252018, (Abschnitt 7.8)

Prüflabore (Akkreditierung):  Eurofins Genomics Europe Applied Genomics GmbH (D-PL-13372, ) Eurofins Genomics Europe Sequencing GmbH (D-PL-17038)

Für akkreditierte Prüfungen bei diesen beiden Gesellschaften  werden Prüfergebnisse ggf. nur  vereinfacht berichtet, d.h. Anforderungen der Norm DIN EN ISO 17025:2018 (Abschnitt 7.8) sind für diese Art der Ergebnisübermittlung  nicht vollumfänglich  zutreffend.

Bei diesen Prüfungen können die Ergebnisse daher auch als Kurzprüfberichte, elektronisch erzeugten Result reports, Exceltabellen oder nur als Ergebnisdateien berichtet werden.

 

Bei Fragen dazu wenden Sie sich bitte an das Customer Care Team.

Es gibt verschiedene Software-Angebote auf dem Markt die man verwenden könnte.

Wir können Ihnen unseren GATCViewer anbieten, den Sie sich kostenlos herunterladen und installieren können.

 

Um sicherzustellen, dass die Sequenzierqualität nicht durch einen technischen Ausfall beeinträchtigt wird, wird bei jedem Sequenzierlauf eine interne Qualitätskontrolle durchgeführt. Darüber hinaus analysiert eine ausgeklügelte Software jede Sequenzier-reaktion unter Berücksichtigung von Parametern wie Qualitätswerten (QV) und Leselängen.

Wenn Sie als Ergebnis Ihrer Sequenzierungsreaktion "DONE_QV_NOT_MET" sehen, bedeutet dies, dass die interne Qualitätskontrolle bestanden wurde, aber einige Probenqualitätswerte nicht erreicht wurden. (z. B. Proben- oder Primerkonzentration oder -volumen, Sequenzdesign oder -struktur usw.)